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蛋白、核酸染料的选择与性能概述

人阅读 发布时间:2015-12-01 10:37

CF 染料是一系列水溶性的高效荧光染料, 用于可见光和近红外光谱区标记生物分子, 尤其是蛋白质和核酸分子。基于新型化学的突破性进展,Biotium 的科学家研发了 CF 染料, 因为下列新颖的特性,使其性能优于其他同类产品,如 Alexa Fluor® 染料。

新型罗丹明化学

罗丹明染料以优异的耐光性和良好的荧光量子产量著称。因此很多 Alexa Fluor® 染料具 有罗丹明核心结构,但是,传统罗丹明的化学结构很难使荧光波长延伸至远红外区域甚至是 更具挑战性的近红外区域,而且生物耦联后其水溶性并不理想。近来,Biotium 科学家发现 一种制备从绿色到近红外多色荧光的罗丹明染料的新型化学方法。该方法被有效的应用于 CF 染料的产品中,尤其是远红外 CF 染料,而且通过这种方法制备的染料不仅水溶性极佳而且耐 光性极好。

卓越的近红外染料

近红外染料最大的特点是比可见光范围要大很多,大滴的染料常会导致染料水溶性低、 染料聚合体多、荧光量子产量差等问题。为了解决这些问题,许多商用的近红外染料比如 Alexa Fluor®、 DyLight®  dyes 和 IRDyes® 近红外染料,在制备时吸附了大量的带负电荷 的磺化基团,其磺化作用可以在一定程度上会提高染料的溶解性和荧光量子产率,但这样也 带来了另一些更加严重的问题,经这种染料标记的生物耦联物的非特异性结合。例如:与大 量负电荷结合后可以显著的改变抗体的等电点,进而影响抗原抗体的特异性结合反应。综合 以上内容,Biotium 的科学家用革命性的方法设计出近红外染料,在避免引入大量负电荷的 情况下,极大的保证了染料优异的理化特性。

Biotium 近红外的 CF 染料以花青或罗丹明染料为核心结构,该核心结构的特殊化学修 饰限制了染料的分子内位移,从而获得染料的高量子产率和更好的水溶性。因此,近红外 CF 染料比其他近红外染料荧光强度更高,光稳定性好。最重要的是,在免疫印迹实验上应用近 红外 CF 染料标记抗体样品相对于其他商业用近红外染料制备的抗体偶联物,最大限度的提高
了信噪比。

优异的标记效率

生物耦联反应的活性染料一般很容易水解,会在运输,操作及储存中带来诸多不便,最 终导致染料结合效率低下。像 Alexa Fluor®  dyes,DyLight™ dyes and IRDyes® 等严重的磺 化作用有较强的吸湿性,恶化水解作用等问题。例如: AlexaFluor®  488 在应用时琥珀酰 亚胺脂酯 SE 活性部分远低于 50%(AlexaFluor488 微量标记试剂盒产品信息,Invitrogen)。 相反,所有 Biotium 的胺活性的 CF 染料具有相对稳定的 SE 基团,这比大部分 AlexaFluor 染 的 SE 更耐水解。总体来说,CFTM 染料 SE 产品一贯的给出更高的标记效率,提供给用户更好的 使用价值。

Mix-n-Stain™ 抗体标记试剂

Biotium 利用 CF 染料已成功研制出一种突破性的抗体标记技术--Mix-n-Stain™ 抗体 标记试剂盒。您只需混合试剂盒中选择的抗体,C FTM 染料及相应的反应缓冲液等,就可以在
30 分钟内得到 CF 染料高效标记的抗体耦联物用于免疫组化等实验。这种标记技术为多色免 疫组化等提供了空前的方便,例如解决了一些当预标记的第一抗体得不到或者由于不同抗体 间的相互作用,通过预标记第二抗体的间接荧光印迹无法实现等情况。
Biotium 目前提供 20 种 CF 染料,还有更多颜色的染料在开发之中。CF 染料系列产品包 括活性 CF 染料,标记试剂盒,CFTM 标记的二抗、链霉亲和素和其他 CF 标记的生物分子。

CF 染料速查表
 
CFTMdye λEx (nm) λEm (nm) Excitation 可替代产品 优点
 
source*
CF™ 350 347 448 UV Alexa Fluor®  350, AMCA, DyLight®  350 •350 nm处激发最亮的蓝色荧光耦合
•高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™ 405S 404 431 405 nm laser Alexa Fluor®  405, Cascade Blue® , •与普通检测仪器有更高的匹配度
DyLight® 405 •高效水溶性及 pH 不敏感
CF™ 405M 408 452 405 nm laser BD Horizon™ V450, •耐光性明显优于 Pacific Blue®   染料
  •525/50 绿色通道少有荧光溢出
eFluor®  450, Pacific •高效水溶性
   
Blue®  
CF™ 488A 490 515 488 nm laser ATTO 488, Alexa Fluor®  488, Cy® 2, DyLight® 488,FAM, FITC,Fluorescein •抗体耦联物的特异性更强,与Alexa
Fluor®  488相比,红色通道少有荧光 溢出
•耐光性好
•高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™ 514 516 548 488 nm laser Alexa Fluor®  514 •混合光谱分解技术中绿色荧光可以
与 CFTM488 区别开来
•优异的光稳定性
•高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™ 532 527 558 532 nm laser AlexaFluor®  532, ATTO 532  
•比 Alexa Fluor®  532 更明亮
 
•高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™ 543 541 560 532, 543, or Alexa Fluor®  546, Tetramethylrhodamine(  
  TAMRA) •比 Alexa Fluor®  546 更明亮
546nm laser    
    •高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™ 555 555 565 532,543,546,,555,or 568 nm laser Alexa Fluor®  555, ATTO 550, Cy® 3,  
555,or 568 nm laser DyLight® 549, TRITC •比 Cy® 3 更明亮
CF™ 568 562 583 532, 543,546, Alexa Fluor®  568, ATTO 565, Rhodamine •568 nm氦氖激发的最优选择
  Red •比 Alexa Fluor 568 更明亮,光稳定性 更强
CF™ 594 593 614 532, 543,546,555,or 568 nm laser Alexa Fluor®  594, ATTO 594, DyLight® •与光谱类似的染料相比产生最亮的
  594, 抗体耦联物
    •良好的光稳定性
  Texas Red®  
CF™ 620R 617 639 633  or  635  nm LightCycler® Red 640 •高荧光强度
  •高效水溶性和光稳定性
laser  
CF™ 633 630 650 633or   635   nm laser Alexa Fluor®  633, Alexa Fluor®  647, Cy® 5, •633 nm He-Ne  激光或he 635 nm红色
DyLight®  633 二极管激光激发下,产生相比于同类 染料产品最亮的荧光抗体耦联物
  •比 Alexa Fluor®  647  光稳定性更好
CF™640R 642 662 633, 635, or Alexa Fluor®  647, ATTO 647N, Cy® 5, DyLight® •在光谱类似于Cy™5 的染料中,该染
  649 料具有最高的光稳定性产生高荧光亮 度的蛋白耦合物
640nm laser   •高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™647 650 665 633, 635, or Alexa Fluor®  647, ATTO 647N, Cy® 5, •比Cy™ 5  明亮,且光稳定性极好
  DyLight® 649 •高效水溶性和对 pH 不敏感
640nm laser    
CF™660C 667 685 633, 635, or Alexa Fluor®  660 •比 Alexa Fluor®  660 明亮,且光稳定
  性极好
640nm laser •高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™660R 663 682 633, 635, or Alexa Fluor®  660 •比Alexa Fluor®  660  明亮
  •660 nm 染料中,具有极好的光稳定 性
640nm laser •高效水溶性和对 pH 不敏感
CF™680 681 698 680  or  685  nm laser Alexa Fluor®  680, Cy® 5.5, DyLight® •680 nm 染料中具有最亮的荧光效果
680,IRDye®  680LT •免疫组化中最优秀的信噪比
  •高效水溶性和对 pH 不敏感
  •兼容 Li-COR Odyssey 红外成像系统
CF™680R 680 701 680  or  685  nm laser Alexa Fluor®  680, Cy® 5.5, DyLight® •680 nm 染料中最优的光稳定性
680,IRDye®  680LT •适用于标记核酸和生物小分子
  •高效水溶性和对pH不敏感
  •兼容 Li-COR Odyssey 红外成像系统
CF™750 755 777 680  or  685  nm laser Alexa Fluor®  750, Cy® 7, •完美的亮度和光稳定性
DyLight®  750, APC-Alexa Fluor® •高效水溶性,不带过多电荷
750, IRDye® 750 •相比于APC-Alexa Fluor®  750 染料, 在633 nm 激发下具有极好的信噪比
CF™770 770 797 785 nm laser DyLight®  800, IRDye®  800CW •优秀的荧光强度和光稳定性
•相比于其他品牌染料具有较低的免 疫源性
•兼容 Li-COR Odyssey 红外成像系统
CF™790 784 806 785 nm laser Alexa Fluor®  790 •完美的亮度和光稳定性
•相比于其他品牌染料具有极低的免疫源性

一、CF™ 活性染料

为了标记蛋白质,核酸和其他生物分子,Biotium 提供多种活性形式的 CF™ 染料:

Succinimidyl ester(琥珀酰亚胺酯,SE)基团标记目标分子的游离氨基,比如蛋白质的赖氨酸残基。 胺活性染料可以牢固地结合破损细胞的细胞膜,而被应用于检测细胞活性的研究中。CF 染料琥珀酰亚胺酯(SE)基团比大部分的胺活性 Alexa Fluor 染料和其他活性染料更抗水解,从而保证其更好的稳定性和优异 的标记效率。Biotium 提供独立的 CF 染料琥珀酰亚胺酯,也提供琥珀酰亚胺酯蛋白质标记试剂盒。其中 试剂盒中提供除了您要准备的每次 1 mg 的蛋白质样品外所有的标记反应材料。
 
Maleimide reactive groups(马来酰亚胺活性基团)可被用于标记目标分子的硫醇类基团,比如蛋白 质的半胱氨酸残基。当琥珀酰亚胺酯标记干涉到了蛋白质的生物活性时,马来酰亚胺可作为琥珀酰亚胺酯 的替代品。

Aminooxy groups(胺氧基团)可迅速与醛基或酮基反应,在不用还原剂的条件下形成牢固的化学联结。 Amine groups 能和生物分子的活活性羧酸基团反应。 CF 染料酰肼类(酰肼类活性基团)可被用来标记带有醛基或酮基的目标分子。CF 酰肼类染料可被用做可视化神经元细胞形态和缝隙连接研究的可固着的荧光极性跟踪器。对于醛基或者酮基的偶偶联物,我 们建议使用 CF 的染色胺氧基团的形式。



活性染料(CF 染料/产品编号)



二、CF 染料生物偶联物




CF 染料生物耦合



三、Mix-n-Stain™ Antibody Labeling Kits

    Catalog Number  
Label/Dye Ex (nm) Em (nm) 1 X (5-20 ug) labeling 1 X (20-50 ug) labeling 1 X (50-100 ug) labeling
Biotin N/A N/A 92244 92266 92286
FITC 494 518 92294 92295 92296
CF™ 350 347 448 92270 92250 92230
CF™ 405S 404 431 92271 92251 92231
CF™ 405M 408 452 92272 92252 92232
CF™ 405L 395 545 92303 92304 92305
CF™ 488A 490 515 92273 92253 92233
CF™ 532 527 558 92289 92290 92291
CF™ 543 541 560 92287 92267 92247
CF™ 555 555 565 92274 92254 92234
CF™ 568 562 583 92275 92255 92235
CF™ 594 593 614 92276 92256 92236
CF™ 633 630 650 92277 92257 92237
CF™ 640R 642 662 92278 92258 92245
CF™ 647 650 665 92279 92259 92238
CF™ 660C 667 685 92280 92260 92239
CF™ 660R 663 682 92281 92261 92243
CF™ 680 681 698 92282 92262 92240
CF™ 680R 680 701 92283 92263 92246
CF™ 750 755 777 92284 92264 92241
CF™ 770 770 797 92285 92265 92242
CF™ 790 784 806 92288 92268 92248

 

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